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ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）：生物檢測領域的超高靈敏度利器

更新時間：2025-08-14 點擊次數(shù)：270

在生命科學研究、醫(yī)學診斷以及生物技術產(chǎn)業(yè)領域，對微量生物分子的高靈敏度檢測一直是研究和應用的關鍵需求。ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）以其靈敏度和優(yōu)異的檢測性能，成為 Western Blot、免疫組化等生物檢測實驗中的重要工具，為科研人員和技術人員提供了精準檢測微量目標分子的有效手段，極大地推動了生物檢測技術的發(fā)展。

一、產(chǎn)品概述與核心特性

ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）是一種基于增強化學發(fā)光（Enhanced Chemiluminescence，ECL）原理的高靈敏度檢測試劑。該發(fā)光液主要由魯米諾（Luminol）、過氧化氫（H?O?）以及特殊的增強劑等成分組成。魯米諾在辣根過氧化物酶（HRP）和過氧化氫的作用下發(fā)生氧化反應，產(chǎn)生化學發(fā)光，而增強劑的加入能夠顯著增強發(fā)光信號，延長發(fā)光時間，使檢測靈敏度提升至飛克（fg，10?1?g）級別，能夠檢測到極低含量的目標蛋白或核酸分子。

從外觀上看，ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）通常為無色透明液體，分為 A 液和 B 液兩種組分，使用時需按照一定比例混合。其化學性質穩(wěn)定，在常溫下可保存一定時間，但為確保最佳性能，一般建議在 4℃條件下避光儲存。該發(fā)光液具有良好的兼容性，可適用于多種固相膜（如 PVDF 膜、硝酸纖維素膜），以及不同來源和類型的辣根過氧化物酶標記抗體，適用于 Western Blot、免疫沉淀、免疫組化等多種生物檢測實驗，應用范圍廣泛。

二、技術原理與作用機制

（一）ECL 發(fā)光原理

ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）的發(fā)光基于魯米諾 - 辣根過氧化物酶（HRP） - 過氧化氫（H?O?）反應體系。魯米諾是一種常用的化學發(fā)光試劑，在堿性條件下，HRP 催化過氧化氫分解產(chǎn)生氧自由基，氧自由基與魯米諾發(fā)生氧化反應，使魯米諾分子處于激發(fā)態(tài)。當激發(fā)態(tài)的魯米諾分子回到基態(tài)時，會以光的形式釋放能量，產(chǎn)生化學發(fā)光。在這個過程中，增強劑起到關鍵作用，它能夠與反應中間產(chǎn)物結合，穩(wěn)定激發(fā)態(tài)分子，減少能量損失，從而顯著增強發(fā)光信號強度，并延長發(fā)光持續(xù)時間，使微弱的化學發(fā)光信號能夠被高靈敏度的檢測設備（如 X 射線膠片、化學發(fā)光成像儀）捕捉和記錄。

（二）檢測流程與信號放大機制

以 Western Blot 實驗為例，在完成蛋白質電泳分離和轉印后，首先使用特異性抗體與目標蛋白進行孵育，形成抗原 - 抗體復合物。隨后加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的二抗，二抗與一抗特異性結合，從而將 HRP 標記到目標蛋白 - 抗體復合物上。當加入混合后的 ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）時，HRP 催化發(fā)光液中的魯米諾和過氧化氫發(fā)生氧化反應，產(chǎn)生化學發(fā)光信號。由于每個目標蛋白分子上結合了多個 HRP 分子，而每個 HRP 分子又能催化多個魯米諾分子發(fā)生發(fā)光反應，這種級聯(lián)放大效應使得極微量的目標蛋白也能產(chǎn)生足夠強的發(fā)光信號，實現(xiàn)飛克級別的檢測靈敏度。

三、應用領域與實際案例

（一）生命科學研究

在蛋白質組學研究中，ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）被廣泛應用于檢測低豐度蛋白質。例如，在研究腫瘤細胞與正常細胞的蛋白質表達差異時，科研人員通過雙向電泳分離細胞中的蛋白質混合物，然后利用 Western Blot 技術結合該發(fā)光液進行檢測。由于腫瘤細胞中某些關鍵的低豐度蛋白質可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，但在常規(guī)檢測中容易被遺漏。而使用 ECL 超敏發(fā)光液（飛克級），能夠成功檢測到這些低至飛克級含量的蛋白質，幫助科研人員發(fā)現(xiàn)新的腫瘤標志物和潛在的治療靶點。

在基因表達調控研究中，檢測轉錄因子與 DNA 的結合情況是重要的研究內容。通過染色質免疫沉淀（ChIP） - Western Blot 實驗，結合 ECL 超敏發(fā)光液（飛克級），可以高靈敏度地檢測到轉錄因子在特定基因啟動子區(qū)域的結合信號。研究人員利用該方法，深入探究了在不同生理或病理條件下，轉錄因子與 DNA 結合的動態(tài)變化，為揭示基因表達調控機制提供了關鍵數(shù)據(jù)。

（二）醫(yī)學診斷

在臨床疾病診斷領域，ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）可用于檢測血液、體液中的微量生物標志物，輔助疾病的早期診斷和病情監(jiān)測。例如，在腫瘤標志物檢測中，檢測血液中如癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）等微量腫瘤標志物的含量，對于腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和預后判斷具有重要意義。使用基于該發(fā)光液的免疫檢測方法，能夠檢測到極低濃度的腫瘤標志物，提高診斷的靈敏度和準確性，有助于實現(xiàn)腫瘤的早發(fā)現(xiàn)、早治療。

在自身免疫性疾病診斷中，檢測患者血清中的自身抗體是重要的診斷依據(jù)。ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）可用于免疫印跡實驗，檢測抗核抗體、抗雙鏈 DNA 抗體等自身抗體的存在和滴度。由于自身抗體在血清中的含量通常較低，該發(fā)光液的高靈敏度特性能夠準確檢測到這些微量抗體，為自身免疫性疾病的診斷和治療方案制定提供可靠支持。

（三）生物技術產(chǎn)業(yè)

在生物制藥領域，ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）是重組蛋白藥物質量控制的重要工具。生產(chǎn)企業(yè)在制備重組蛋白藥物后，需要對藥物的純度、含量以及生物活性進行嚴格檢測。通過 Western Blot 實驗結合該發(fā)光液，能夠檢測到藥物中微量的雜質蛋白和降解產(chǎn)物，確保產(chǎn)品質量符合標準。例如，在重組抗體藥物的研發(fā)和生產(chǎn)過程中，使用該發(fā)光液檢測抗體藥物的純度和效價，保障藥物的安全性和有效性。

在生物技術產(chǎn)品研發(fā)過程中，如新型疫苗的研發(fā)，需要檢測疫苗中抗原蛋白的含量和免疫原性。ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）可用于免疫檢測實驗，高靈敏度地檢測疫苗中微量抗原蛋白的含量，評估疫苗的免疫效果，為疫苗的研發(fā)和優(yōu)化提供數(shù)據(jù)支持。

四、使用方法與注意事項

（一）使用方法

準備工作：在使用 ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）前，將所需的實驗器具（如 Western Blot 膜、雜交袋、搖床等）清洗干凈并晾干，確保無雜質污染。將發(fā)光液從冰箱中取出，平衡至室溫（一般為 20 - 25℃），以保證試劑的穩(wěn)定性和反應效果。

抗體孵育與洗滌：按照 Western Blot 等實驗的常規(guī)流程，完成蛋白質電泳分離、轉印以及一抗、二抗的孵育和洗滌步驟。確保在加入發(fā)光液前，膜上殘留的洗滌緩沖液被盡量吸干，避免過多的緩沖液稀釋發(fā)光液，影響發(fā)光效果。

發(fā)光液混合與孵育：將 A 液和 B 液按照試劑盒說明書推薦的比例（通常為 1:1）混合均勻，立即將混合后的發(fā)光液均勻覆蓋在膜表面，確保膜浸潤在發(fā)光液中。室溫孵育 1 - 5 分鐘，使發(fā)光反應充分進行。

信號檢測：孵育完成后，用鑷子小心取出膜，去除多余的發(fā)光液（可將膜輕靠在吸水紙上吸干多余液體，但避免膜干燥）。根據(jù)檢測設備的不同，選擇合適的檢測方法：若使用 X 射線膠片檢測，將膜放入雜交袋中，排出空氣后密封，在暗室中將膠片覆蓋在膜上曝光適當時間（根據(jù)信號強度調整曝光時間，從幾秒到數(shù)小時不等），然后進行膠片顯影和定影處理；若使用化學發(fā)光成像儀檢測，將膜放入成像儀樣品室中，設置合適的曝光時間和增益參數(shù)，進行圖像采集和分析。

（二）注意事項

試劑儲存與有效期：ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）應避光保存于 4℃冰箱中，避免高溫和陽光直射。使用前要仔細查看試劑盒的有效期，過期的試劑可能會導致發(fā)光信號減弱或不穩(wěn)定，影響檢測結果，應避免使用。開啟后的發(fā)光液盡量在短時間內用完，若需保存，應密封后放回 4℃冰箱，并盡快使用。

操作規(guī)范：在實驗操作過程中，要嚴格遵守無菌操作原則，使用無菌的移液器和容器，防止樣品和試劑受到污染。混合 A 液和 B 液時，應快速、準確，避免長時間暴露在空氣中，防止發(fā)光液提前發(fā)生反應或被氧化，影響發(fā)光效果。在孵育和檢測過程中，要避免膜干燥，一旦膜干燥，會導致發(fā)光信號不均勻或減弱，影響實驗結果的準確性。

干擾因素：某些物質可能會干擾 ECL 發(fā)光反應，如還原劑、重金屬離子等。在實驗前，要確保樣品和實驗過程中使用的試劑不含此類干擾物質。如果樣品中可能存在干擾物質，需要進行適當?shù)念A處理，如透析、超濾等方法去除干擾，以保證檢測結果的可靠性。

安全防護：發(fā)光液中的部分成分可能具有一定的刺激性或毒性，操作時應佩戴手套、口罩等防護用具，避免接觸皮膚和吸入。若不慎接觸到試劑，應立即用大量清水沖洗，并根據(jù)試劑性質進行相應的處理。廢棄的發(fā)光液應按照實驗室廢棄物處理規(guī)定進行處置，不可隨意丟棄，防止環(huán)境污染。

ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）憑借其超高的靈敏度、廣泛的應用范圍和便捷的操作性能，在生物檢測領域發(fā)揮著不可替代的重要作用。隨著生命科學研究的不斷深入和生物技術的快速發(fā)展，對微量生物分子檢測的需求將持續(xù)增加，ECL 超敏發(fā)光液（飛克級）也將不斷創(chuàng)新和優(yōu)化，為生物檢測技術的進步和生命科學領域的發(fā)展提供更強大的支持。